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本制品是采用TaqMan探针法进行Real-Time PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针），该预混液将化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP染料等试剂预混在一起，是一种5×浓度的单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、模板、水即可。

本制品中的DNA聚合酶为化学法修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶，该酶在50℃以下100%无活性，只有95℃条件下加热15min后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增，极大的提高了PCR扩增特异性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

本制品配有单独的ROX内参染料，使得该试剂可应用于所有RealTime PCR机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；LightCycler (Roche Diagnostics)；Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

产品组成：

组分	20μl×100T	20μl×500T
5×Probe qPCR MasterMix	400μl	1ml×2
50×ROX Reference Dye	200μl	200μl

保存条件：-20℃，有效期2年。
长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀，不影响试剂性能。经常使用，融化后可置于4℃，可保存1年。

产品特点：

• 热启动酶采用化学修饰，100%热启动
• 单组份预混液，使用方便快捷
• 高特异性，有效抑制非特异性扩增
• 高灵敏度，可检测低丰度基因
• 适用于所有实时定量PCR仪器

反应实例：

图:应用本试剂盒进行TaqMan探针法检测10～10⁷ copy模板的扩增曲线和标准曲线。

操作方法：

• 根据机型选择步骤A或B
  A．需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
  

  成分	用量	终浓度
  5×Probe qPCR MasterMix	4μl	1×
  50×ROX Reference Dye	0.4μl	1×
  PCR Forward Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
  PCR Reverse Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
  TaqMan Probe (10μM)	0.4μl	0.2μM
  DNA模板	0.5~2μl	-
  ddH2O	Up to 20μl	-

  
  
  B．无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-TimePCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
  

  成分	用量	终浓度
  5×Probe qPCR MasterMix	4μl	1×
  PCR Forward Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
  PCR Reverse Primer(10μM)	0.8μl	0.4μM
  TaqMan Probe (10μM)	0.4μl	0.2μM
  DNA模板	0.5~2μl	-
  ddH2O	Up to 20μl	-

  
   
• 进行Real-Time PCR反应，通常采用两步法，程序如下：
  

  阶段	温度	时间	循环数
  Stage 1:	95℃	15min	1
  Stage 2:	95℃	10s	35~45
  	60℃	60s

  
  注意：由于该酶为化学修饰的热启动Taq DNA聚合酶，必须于95℃加热15min才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短或延长。
   
• 反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线和标准曲线。

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